貨源介紹
DU 145細(xì)胞是從一位有3年淋巴細(xì)胞白血病史的前列腺癌患者的腦部轉(zhuǎn)移病灶損害中建株的。DU 145細(xì)胞和從軟瓊脂中分離到的細(xì)胞不具有可檢測(cè)的激素敏感性,酸性磷酸酶呈弱陽性。對(duì)DU 145細(xì)胞及原始腫瘤細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)分析可見微絨毛,微絲及細(xì)胞橋粒,有許多線粒體,發(fā)育良好高爾基體和異質(zhì)溶酶體。DU 145細(xì)胞不表達(dá)前列腺抗體。
種屬:人
年齡(性別)男;69歲
組織來源:前列腺;轉(zhuǎn)移灶;腦癌
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基:MEM+10% FBS)+1% P/S
培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃
傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次;
加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化;
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻;
收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
凍存步驟
細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù);
4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10(6)/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí);
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞用途
僅供科研使用。
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