貨源介紹
細胞名稱:AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞)
種屬:人
年齡(性別)女;13歲
組織來源器官:外周血;疾?。杭毙詥魏思毎籽?;細胞類型:單核細胞
生長特性:懸浮
細胞形態:淋巴母細胞樣
背景描述:白細胞介素3(IL-3)和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)可協同刺激AML-193細胞生長。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)也能支持AML-193細胞短期和長期生長,并與GM-CSF一起誘導細胞增殖;這株細胞正式命名為HTB-188。
生長培養基:IMDM+5μg/ml Insulin+5μg/ml Transferrin+5ng/ml GM-CSF+5%FBS+1%P/S
培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃
細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
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