貨源介紹
細(xì)胞名稱(chēng):AML-193(人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞)
種屬:人
年齡(性別)女;13歲
組織來(lái)源器官:外周血;疾病:急性單核細(xì)胞白血病;細(xì)胞類(lèi)型:?jiǎn)魏思?xì)胞
生長(zhǎng)特性:懸浮
細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣
背景描述:白細(xì)胞介素3(IL-3)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)可協(xié)同刺激AML-193細(xì)胞生長(zhǎng)。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)也能支持AML-193細(xì)胞短期和長(zhǎng)期生長(zhǎng),并與GM-CSF一起誘導(dǎo)細(xì)胞增殖;這株細(xì)胞正式命名為HTB-188。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基:IMDM+5μg/ml Insulin+5μg/ml Transferrin+5ng/ml GM-CSF+5%FBS+1%P/S
培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃
細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
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