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AML-193人急性單核細胞白血病單核細胞

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所在地區:湖北 時間:2024-01-09【加入收藏夾】【關閉

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  細胞名稱:AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞)

  種屬:人

  年齡(性別)女;13歲

  組織來源器官:外周血;疾?。杭毙詥魏思毎籽?;細胞類型:單核細胞

  生長特性:懸浮

  細胞形態:淋巴母細胞樣

  背景描述:白細胞介素3(IL-3)和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)可協同刺激AML-193細胞生長。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)也能支持AML-193細胞短期和長期生長,并與GM-CSF一起誘導細胞增殖;這株細胞正式命名為HTB-188。

  生長培養基:IMDM+5μg/ml Insulin+5μg/ml Transferrin+5ng/ml GM-CSF+5%FBS+1%P/S

  培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃

  細胞處理:

  1)凍存細胞的復蘇:

  將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

  2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

  對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

  1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

  3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

  3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

  智立中特(武漢)生物科技有限公司主要致力于質粒微生物資源的保護、共享和持續利用,圍繞我國生命科學研究、生物技術創新和產業發展等重大需求,探索、發現、收集國內外的微生物資源,妥善長期保存管理;在保證生物安全和保護知識產權的前提下,為工農業生產、衛生健康、環境保護、科研教育提供質粒載體物物種資源、基因資源、信息資源和專業技術服務。旗下質粒載體網是一款提供質粒載體展示及定制的專業型網站,由智立中特(武漢)生物科技有限公司聯合多家企業公司科研院校共同打造!主要展示了各種基因類型下的質粒載體!

  我們的工作主要包括:廣泛分離、收集、保藏、交換和供應各類微生物質粒菌種;保存用于專利程序的各種可培養生物材料;質粒載體類保藏技術研究;微生物分離、培養技術研究;微生物鑒定和復核技術研究;保藏菌種的資料情報收集和提供及編輯微生物菌種目錄。

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