貨源介紹
質(zhì)粒載體網(wǎng)主要對(duì)載體質(zhì)粒類目下產(chǎn)品展示,不僅提供質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞及培養(yǎng)基等相關(guān)產(chǎn)品訂購(gòu),同時(shí)可以為客戶提供質(zhì)粒構(gòu)建、載體設(shè)計(jì)及菌種細(xì)胞鑒定,還對(duì)包括ATCC、JCM、KCTC等進(jìn)口微生物資源提供訂購(gòu)及保藏服務(wù)。
細(xì)胞名稱EB-3(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)
種屬人
年齡(性別)男;3歲
組織來(lái)源
生長(zhǎng)特性懸浮
細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣
背景描述EB-3細(xì)胞源自一名3歲患有Burkitt's淋巴瘤的黑人男孩的B淋巴細(xì)胞,EBNA陽(yáng)性。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃
細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
1.收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
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