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貨源介紹

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　　人結直腸腺癌細胞阿霉素耐藥株

　　平臺編號:zl-016899

　　細胞信息:LoVo/ADR

　　產品規格:1×10?cells/T25培養瓶

　　注意事項:僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

　　細胞特性

　　1）來源：結直腸腺癌

　　2）形態：上皮樣細胞，貼壁生長

　　3）含量：>1x106個/mL

　　4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

　　運輸和保存

　　（1）使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。

　　（2）收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至250px培（3）養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

　　細胞用途：僅供科研使用。

　　細胞培養步驟

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　注意：培養瓶里面的培養液是不含藥物的，待細胞長到70-80%匯合度時，去掉培養液，加含500ng/ml阿霉素藥物的培養液，放入培養箱，這段時間會有少部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細胞長滿就可以消化傳代了，這時可以一直用含藥物培養基來培養細胞，兩代之后就可以將藥物濃度提高到1000ng/ml，細胞凍存時不要在培養基中加藥物。

　　1）準備F12K培養基(F12K，SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；優質胎牛血清，10%，添加1000ng/ml的阿霉素。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　二．細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。