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LoVo/ADR人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

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所在地區(qū):湖北 時間:2023-10-07【加入收藏夾】【關(guān)閉

貨源介紹

  人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

  平臺編號:zl-016899

  細(xì)胞信息:LoVo/ADR

  產(chǎn)品規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

  注意事項:僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))

  細(xì)胞特性

  1)來源:結(jié)直腸腺癌

  2)形態(tài):上皮樣細(xì)胞,貼壁生長

  3)含量:>1x106個/mL

  4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

  5)規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

  運(yùn)輸和保存

  (1)使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。

  (2)收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至250px培(3)養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

  細(xì)胞用途:僅供科研使用。

  細(xì)胞培養(yǎng)步驟

  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

  注意:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的,待細(xì)胞長到70-80%匯合度時,去掉培養(yǎng)液,加含500ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間會有少部分細(xì)胞懸浮起來,屬于正常情況,通過換液可以去掉,等細(xì)胞長滿就可以消化傳代了,這時可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,兩代之后就可以將藥物濃度提高到1000ng/ml,細(xì)胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物。

  1)準(zhǔn)備F12K培養(yǎng)基(F12K,SIGMA,貨號N3520,添加NaHCO3 2.5g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,添加1000ng/ml的阿霉素。

  2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

  3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

  二.細(xì)胞處理:

  1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

  對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

  1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

  2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

  3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

  4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

  3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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